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細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)-（培養(yǎng)、傳代、凍存）
來源:
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作者:和諾
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發(fā)布時(shí)間: 2014-11-04
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培養(yǎng)基的配置：基礎(chǔ)培養(yǎng)基500ml+胎牛血清50ml+雙抗5ml
凍存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超凈工作臺常規(guī)配置：
移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精燈1盞，液器1臺，斜架1臺，酒精噴壺1個(gè)，酒精棉球缸1個(gè)，污缸1個(gè)，
常規(guī)耗材：培養(yǎng)瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），槍頭（1ml、200μl、10μl），培養(yǎng)皿，6/24/48/96孔板，醫(yī)用脫脂棉球，保種管
所需試劑：gibco高糖培養(yǎng)基，胎牛血清，雙抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
所需的各項(xiàng)高壓后的耗材放于超凈工作臺內(nèi)，用酒精噴壺噴灑實(shí)驗(yàn)臺面，并關(guān)閉工作臺打開紫外燈照射30min后開始實(shí)驗(yàn)操作。
首次傳代前細(xì)胞的復(fù)蘇，首先用一大燒杯盛滿37℃的溫水放于液氮罐旁邊，待細(xì)胞株取出后留上端1/3于37℃水面上盡最大速搖動管使其在2min內(nèi)迅速融化。若種管頂部含有凍存的細(xì)胞液在搖動期間用力甩動使其降于管底后再搖動。這一過程可在超凈工作臺外操作。